domingo, 21 de diciembre de 2014

EJEMPLO DE ADN RECOMBINANTE EN LA NATURALEZA


El ADN recombinante que no se obtiene a partir de técnicas moleculares desarrolladas en laboratorios se conoce como RECOMBINACIÓN GENÉTICA, la recombinación genética es un proceso que lleva a la obtención de un nuevo genotipo a través del intercambio de material genético entre secuencias homólogas de DNA de dos orígenes diferentes. Por lo tanto la recombinación genética es otra forma efectiva de aumentar la variabilidad genética de una población.Ejemplos de este tipo de recombinación tenemos:
- recombinación en la reproducción viral
- recombinación por transformación bacteriana
- cambio de clase de inmunoglobulinas
- conversión génica
- recombinación no homóloga



REFERENCIAS

ADN RECOMBINANTE EN LA NATURALEZA





ADN recombinante: esta tecnología permite obtener fragmentos de ADN en cantidades ilimitadas, intercalando un segmento de ADN extraño a un ADN receptor, que pueden ser células de otros organismos (vegetales, animales, bacterias, etc.) en los que se expresará la información de dichos genes.

ADN EN HIPERTENSIÓN ARTERIAL

La tecnología del ADN recombinante puede ser aplicada para identificar a los genes marcadores de esta enfermedad. La determinación de genes marcadores como los antígenos humanos de leucocitos (HLA), localizados en algunos cromosomas, como los responsables de enfermedades específicas, puede ser aplicada para el conocimiento de la genética de la HAS; de hecho, hay estudios que sugieren que los genes responsables de la HAS se localizan en el mismo cromosoma del complejo HLA; en consecuencia es factible que en el futuro el HLA pueda ser utilizado para predecir el riesgo de desarrollar HAS. La genética de la HAS puede ser investigada también con la utilización de fragmentos de polimorfismo restrictivo de longitud de alelos, que puede ser aplicado a renina, angiotensina, endotelina, o PNA.





REFERENCIAS 

sábado, 13 de diciembre de 2014

PRUEBA DE HIBRIDACION O SECUENCIACION EN LA HIPERTENSION ARTERIAL




Las técnicas moleculares, como la reacción en cadena de la polimerasa y la hibridación in situ, han permitido la detección directa de los genomas virales en los corazones de los pacientes.
La técnica de múltiple FISH o hibridación in situ con fluorescencia de todos los cromosomas se utiliza en el mundo desde hace 5 años. y a causado revuelo por la introducción de colores en la citogenética tradicionalmente gris.
Esta técnica se basa en la capacidad que tienen los fragmentos de ácido nucleico de cadena sencilla de unirse a otros fragmentos de ácido nucleico de cadena sencilla cuya secuencia sea complementaria.
En pacientes con hipertensión arterial sometidos a endarterectomía carotídea, se usa la hibridación in situ (FISH), para determinar alteraciones en los cromosomas 7 y 11 y en la expresión del FGF-3.
Los procesos automatizados de análisis corrigen la imagen geométrica, calculan el delineamiento de cada cromosoma con una tinción general de ADN con DAPI (4’-6-diamidino-2-phenilindole).


REFERENCIA 

domingo, 7 de diciembre de 2014

ANALISIS DE PCR EN HIPERTENSION ARTERIAL



T: Polimorfismos genéticos del sistema renina-angiotensina e hipertensión arterial esencial en la población española

O: Estudiar la asociación entre los principales polimorfismos genéticos del SRA con expresión funcional y el riesgo de HTAE en la población española, empleando para ello un diseño de casos y controles con un tamaño de muestra amplio y criteros estrictos en la elección de los grupos a comparar. De este modo intentamos comprobar los hallazgos de estudios previos añadiendo nuevos polimorfismos a los estudiados con anterioridad, y analizar el posible efecto epistático entre estos genes.

M: sangre periférica (leucocitos)

AN: ADN genómico

G: Gen de la ECA de una secuencia de 287 pares de bases en el intrón 16 del gen, gen del angiotensinógeno de un segmento de 303 pares de bases en el exón 2.

PCR: PCR simple


V: EFO


REFERENCIA

sábado, 29 de noviembre de 2014

PCR EN HIPERTENSION ARTERIAL



La PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa) es de mucha utilidad para determinar la Hipertensión arterial de origen genético, ya que puede presentarse debido a la alteración en cualquiera de los genes del sistema Renina-Angiotensina. La proteína C reactiva (PCR) es un predictor de eventos cardiovasculares adversos.

Se realizó PCR para la determinación de los polimorfismos I/D del gen de la enzima conversiva de la angiotensina (ECA), A-6G y M235T del gen del angiotensinógeno y A1166C del gen del receptor AT1 de la angiotensina.

Se obtuvieron muestras de ADN a partir de leucocitos de sangre periférica según el procedimiento descrito por Leadon y Cerutti23. El polimorfismo I/D del gen de la ECA se determinó detectando la presencia (alelo inserción, I) o ausencia (alelo deleción, D) de una secuencia de 287 pares de bases en el intrón 16 del gen, situado en el cromosoma 17, aplicando la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR).


En los resultados obtenidos no hubo diferencias en las distribuciones genotípicas ni alélicas entre casos y controles. En hipertensos tampoco hubo diferencias al comparar genotipos y distribución alélica según terciles de valores de presión arterial o presencia/ausencia de antecedentes familiares de HTA. Sólo en mujeres se detectó un mayor riesgo de hipertensión en las pacientes con haplotipos que contenían el alelo C del polimorfismo A1166C con los alelos A del polimorfismo A-6G (p = 0,007) o T del polimorfismo M235T (p = 0,007).





REFERENCIA


sábado, 22 de noviembre de 2014

EPIGENETICA EN LA HIPERTENSION ARTERIAL




La hipertensión arterial (HTA) refleja una disrupción en el delicado equilibrio que mantienen los diversos factores genéticos, epigenéticos y ambientales.

En la enorme mayoría de los casos (95%), la HTA no depende de una causa única, sino que es de origen poligénico y multifactorial. Solo 5% de los casos de HTA tiene como causa la mutación de un gen único, que se transmite en la familia siguiendo un modelo mendeliano.

Hasta el momentos se han identificado unos 150 locis (lugares) cromosómicos que alojan genes directa o indirectamente relacionados con HTA. Estos genes codifican proteínas que influencian en cualquiera de los factores fisiopatológicos determinantes de HTA: contractibilidad miocárdica, volemia y resistencia vascular. Los genes candidatos más importantes son probablemente los relacionados al sistema renina-angiotensina-aldosterona (SRAA).

Varias enfermedades surgen por alteraciones epigenéticas; por ello una relación con la mal nutrición materna, peso bajo de nacimiento y probabilidad de presentar hipertensión arterial en la edad adulta, están condicionados por factores epigenéticos; se considera que en el cambio de la niñez a la adultez hay cambios en la regulación de ciertos genes. Estos cambios son inducidos por factores ambientales que conllevan a un aumento en la susceptibilidad de contraer ciertas enfermedades crónicas del adulto. La preclamsia con su componente hipertensivo también tiene una influencia epigenética.

La alimentación también tiene una importante relación con la epigenética, ya que si una persona se encuentra predispuesta genéticamente a desarrollar cierta enfermedad y realiza cambios adecuados en la dieta estos actuarán de manera epigenética positiva, evitando o atenuando dicha enfermedad. Asimismo si la dieta es inadecuada la influencia epigenética será negativa, desencadenando o agravando la enfermedad. Sin embargo en la actualidad los hábitos alimenticios han empeorado, ya que hay un excesivo consumo de grasas; esto ha dado lugar a que, enfermedades como la Obesidad, Diabetes, Cáncer e Hipertensión Arterial, se presenten con mayor frecuencia y a edades cada vez más tempranas.

Por esta razón es importante incluir en la dieta alimentos ricos en metilo, por ejemplo folatos, necesarios para la síntesis de S-adenosilmetionina, donador de los grupos metilo necesarios para la metilación del ADN; estos alimentos son principalmente verduras de hoja verde y alimentos como el brócoli, granda y aguacate.

Referencias 

viernes, 14 de noviembre de 2014

ALTERACIONES EN LA TRADUCCION EN LA HIPERTENSION ARTERIAL


En la hipertensión arterial sistémica (HAS), algunos de los genes para ser estudiados son los que tienen relación con el sistema noradrenérgico, con el eje RAA (sistema renina–angiotensina–aldosterona), con las proteínas G de traducción transmembranal; la alfa–aducina, componente de citoesqueleto, que está involucrada en el contacto intercelular, en el transporte iónico transmembrana, la traducción de señales y el balance de sodio; y las proteínas que forman los canales iónicos, las bombas de cationes, los intercambiadores y los cotransportadores. Además, deben tener importancia algunos genes que producen y modulan la respuesta inmune e inflamatoria, la rigidez arterial y la resistencia a la insulina, entre otros.


En el gen ATP2B1 se encontraron varios SNPs, tanto para HTA sistólica, diastólica y ambas, siendo el más importante rs2681472.

ESTUDIOS DE SECUENCIA DE ADN

Los estudios de secuenciación del ADN, búsqueda de polimorfsmos y variantes a través de polimorfsmos de nucleótido simple (su sigla en inglés SNPs), se han utilizado para buscar asociaciones con enfermedades multifactoriales o complejas.

En el año 2005, se buscó asociaciones entre la presencia de HTA y polimorfismos del gen WNK1,responsable del síndrome de Gordon, enfermedad autosómica recesiva, caracterizada por pseudohiperaldosteronismo tipo II e HTA, donde WNK1 regula la recaptación de Na+ y Cl- en las porciones distales del nefrón. Se estudiaron pacientes hipertensos sin el síndrome, observando que no existía relación entre polimorfismos para WNK1 y la presencia de HTA, pero sí en la severidad de ésta cuando estaba presente.

Para HTA sistólica, el con mayor poder de asociación fue el polimorfismo en 10q24, próximo a CYP17A1, perteneciente a la familia del citocromo P450, que codifica para una enzima participante en la vía de los mineralocorticoides. El segundo polimorfsmo se encontró en 1p36, próximo a diversos genes, la mayor señal se encuentra en rs7537765, una variante codifcante que se relaciona con mayores concentraciones de homocisteína, preeclampsia e hipertensión variable. El tercer polimorfismo estaba en la región 17q21, localizado en el intrón de PLCD3 perteneciente a la familia de fosfolipasa 3, presente en la túnica muscular de las arterias, participando en la señalización de angiotensina II y endotelina.

Para HTA diastólica, la señal más fuerte fue en el polimorfismo de rs1378942 ubicado en el intrón de CSK (c-src tirosinquinasa) en 15q24. Así como los genes CYP1A2, pertenecientes a la familia de los citocromos P450, relacionados al metabolismo de la cafeína, LMAN1L codifca para una proteína participante en el transporte intracelular y ARID3B codifica para una proteína que se une a sitios ricos en AT en el ácido desoxirribonucleico (ADN), siendo su mutación letal en períodos embrionarios. El segundo SNP es rs16998073, ubicado en 4q21, próximo a FGFR5 estimula el crecimiento de diversos tipos celulares. El tercer SNP es rs653178 en 12q24, localizado en el intrón del gen ATXN2 que está relacionado con otro SNP (rs3184504), que produce un error del marco de lectura en el exón 3 del gen SH2B3, que se ha asociado a diabetes tipo 1, enfermedad celiaca, eosinofilia, infarto al miocardio e HTA, este gen se expresa en células hematopoiéticas y endoteliales. El cuarto SNP es rs1530440 en 10q21, ubicado en C10orf107. El quinto SNP es rs16948048 en 17q21, ubicado próximo a los genes ZNF652 y PHB, ninguno de ellos ha sido previamente relacionado con HTA.

REFERENCIAS

sábado, 8 de noviembre de 2014

ALTERACIONES EN LA TRANSCRIPCION DE ADN EN LA HIPERTENSION ARTERIAL






El código epigenético determina la apertura o cierre de la cromatina para exponer o no una determinada región del ADN, permitiendo su transcripción. El gen del angiotensinógeno, gen que había demostrado un ligamiento con la HTA, dió como resultado el cambio de una guanina por adenina en la posición –6 de la región promotora del gen AGT, afectaba el promedio de transcripción basal del gen AGT y estaba asociado en forma significativa con la presencia de hipertensión.

La enzima 11ßHSD2 es la encargada de convertir el cortisol a cortisona impidiendo que éste se una al receptor mineralocorticoideo. Los mineralocorticoides, cuyo principal referente es la aldosterona, se unen con gran afinidad al receptor de mineralocorticoides (MR) y estimulan la reabsorción renal de sodio. Al unirse con su ligando, el MR transloca desde el citoplasma al núcleo donde el complejo esteroide-receptor se une a elementos de respuesta (MRE) en el ADN, regulando la transcripción de diversos genes entre los que figuran los del canal renal de sodio y de la bomba sodio-potasio ATPasa que producen a su vez un aumento del transporte tubular de sodio y agua.

En casos de hiperaldosteronismo primario, el aumento de aldosterona induce una mayor activación de este receptor lo que genera retención de sal y con ello, elevación de la presión arterial

Existen variaciones a nivel genético más leves que las mutaciones, deleciones o inserciones, que pueden producir efectos menos dramáticos en la función normal de la proteína y por lo tanto una patología más leve en las personas que portan estas variaciones. Dentro de estas variaciones se encuentran las repeticiones en tándem de di, tri y tetranucleótidos denominadas secuencias «microsatélites», en la actualidad existen evidencias de que estas secuencias podrían regular la transcripción de los genes que las contienen.


El aumento de la transcripción de estos genes contribuirá al aumento de la reabsorción de sodio y agua, lo que explicaría la caída de los niveles de ARP como mecanismos de respuesta fisiológica al aumento de la volemia y presión arterial. La transcripción puede depender de la ocupación estérica de la hebra de ADN por varios factores trans-acting, y éstos, a su vez, del número de repeticiones o motivos repetitivos presentes. 


BIBLIOGRAFIA


domingo, 2 de noviembre de 2014

ALTERACIONES EN LA REPLICACION DE ADN EN LA HIPERTENSION ARTERIAL




La regulación de la presión arterial (PA) es un proceso fisiológico complejo, en el que intervienen factores genéticos. 

El principio básico de esta teoría es una alteración en el ácido desoxirribonucleico (ADN), lo cual implica que en distintas moléculas se producen anomalías y por tanto su función se modifica.
A estos ADN se les denomina genes hipertensivos los que intervienen a nivel sistémico: gen de renina, genes que codifican la kinina, la kalicreína y las prostaglandinas renales, gen de la hormona natriurética y genes de los mineralocorticoides y aquéllos que regulan a nivel celular genes que codifican factores que regulan la homeostasis del calcio y el sodio, por ejemplo: fosfolipasa C, bomba de sodio-potasio, proteína C y el fosfoinositol, principalmente.

En esta teoría también se menciona que la predisposición genética puede estar latente, pero debe existir un estímulo que dispara la replicación del ADN, entre los que se mencionan: la ingestión excesiva de sal y el estrés emocional.





BIBLIOGRAFIA


domingo, 26 de octubre de 2014

PRUEBA DE SCREENING DE HIPERTENSION ARTERIAL



El término "High Throughput Screening (HTS)", o cribado farmacológico de alto rendimiento, consiste en testar grandes colecciones de compuestos químicos o productos naturales para identificar moléculas biológicamente activas. En la era post-genómica, el HTS está siendo fundamental para el descubrimiento de nuevos fármacos.

PRUEBA DE SCREENING EN EMBARAZOS 

Estudio retrospectivo, longitudinal con alcances de tipo descriptivo de gestantes con embarazo único que se presentaron a control prenatal en obstetricia y ginecología y a quienes se les realizó tamizaje integrado entre las 11 y136/7 semanas, con determinación de Doppler arterias uterinas (IP); se revisaron historias clínicas, con seguimiento hasta el final del embarazo y comparación de los resultados en las pacientes que desarrollaron trastornos hipertensivos del embarazo con las que no.


PRUEBA DE SCREENING EN ADULTOS

Se seleccionó a 244 pacientes a través de la revisión de historias clínicas, evaluándolos mediante los criterios de Peterson y Mini - Mental State Examination en consultorio externo o un ambiente adecuado para ello; los datos fueron procesados a través de un análisis descriptivo

La frecuencia de DCL fue 39,75%, de los cuales el 31,96% corresponde al género masculino y 68,04% al género femenino, fue más frecuente en mayores de 80 años (54,67%) y con menor grado de instrucción (primaria: 74,23%); la enfermedad cardiovascular encontrada con mayor frecuencia fue la hipertensión arterial y el área más afectada la atención y cálculo. 


REFERENCIAS 



El Hiperaldosterismo primario es una de las causas conocidas de HTA secundaria debido a una excesiva y autónoma producción de aldosterona, produciendo un aumento del volumen intravascular y elevación de la presión arterial. La prevalencia del HAP ha sido estimada en menos del 1% de los hipertensos cuando la hipokalemia es usada como test de screening. También se pueden medir aldosterona plasmática (AP), actividad de renina plasmática (ARP), y la relación AP/ARP (ARR) en el screening de esta enfermedad.

ENFOQUE DIAGNOSTICO DEL HAP

El diagnostico de HAP confirma la autonomía de la secreción de aldosterona del eje renina angiotensina por lo que se usan test de screening y confirmatorios.

1. Test de screening del HAP: la hypokalemia ha sido considerada como el elemento clásico para el diagnóstico de HAP. Estudios recientes demostraron que niveles disminuidos de potasio plasmático se presentan solo en 20% de los pacientes afectados por un HAP. El HAP normokalémico constituye la forma más común de presentación de la enfermedad, y la variante hipokalémica probablemente la forma más severa de la enfermedad.


2. Test confirmatorios más usados en HAP: la confirmación del diagnóstico de HAP se basa en demostrar la autonomía de la producción de aldosterona a través de un test de supresión.


a)  Test de fudrocortisona: los niveles de AP son medidos en la condición basal y después de 4 días de administrar acetato de fludrocortisona bajo una dieta suplementada con sodio. Las muestras de sangre se toman al 5 dia a las 8:00 am, el test de fludocortisona es considerado positivo cuando la AP mantiene valores sobre 5 ng/dl.


b)  Test de sobrecarga o infusión salina: consiste en la administración de una solución salina isotónica de 500 ml/hora durante 2 - 4 horas. La persistencia de AP sobre 5 ng/dl confirma en diagnóstico de HAP. Ambos test deben ser cuidadosamente monitorizados en ancianos y evitados en pacientes con hipertensión severa, insuficiencia cardiaca severa, etc.

c)  Prueba de captopril: se efectúa en posición sentada al menos 60 minutos antes y durante toda la prueba. A las 9 am se administra 25 mg de captopril y a los 120 min se mide AP y actividad de renina plasmática. El test es positivo si al final la ARR es >30 o la AP es >8.5 ng/dl


REFERENCIAS